Fluntirazepam(FM2) 單株抗體生產之研究

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Title:	Fluntirazepam(FM2) 單株抗體生產之研究 Studies on the Development of Production of Monoclonal Antibodies against Flunitrazepam (FM2)
Authors:	周淑芬(Shu-Fen Chou) 黃國旭(Guo-Xu Huang) 張竣凱(Jiunn-Kae Chang) 楊朝成(Chau-Chen Yang)
Contributors:	嘉南藥理科技大學生物科技系嘉南藥理科技大學化粧品科技研究所
Date:	2008-07
Issue Date:	2017-12-04 15:57:44 (UTC+8)
Abstract:	背景與目的：FM2學名Flunitrazepam，商品名為Rohypnol，FM為學名前後英文字母的縮寫；其商業製劑每顆通常為2毫克，因此得名為FM2。屬於Benzodiazepine類的鎮靜劑，在世界各國幾乎都使用此藥作為中長效性安眠藥，而因為其無色無味有很好的水溶性，溶解後不易被察覺，常將其滲入飲料迷昏女性，再加以強暴，故有「約會強暴丸」之稱。分子式為C16H12FN3O3，分子量為313.3 Dalton。口服後可被人體完全吸收，其藥理機轉為先活化GABA(γ-Aminobutyric acid；γ-胺基丁酸)，使其作用於GABA receptor上，進而活化副交感神經使人達到放鬆目的；因為GABA是抑制性的神經傳導物質，除了鎮靜效果，還具有安神、肌肉鬆弛、抗癲的療效。本篇研究目的為生產製備具有辨識FM2分子能力的單株抗體。方法：首先，由於FM2分子量太小，在生產抗體的過程上會遇到無法發生體液性免疫的反應，因此要先把FM2運用bioconjugate的方式接在其他大分子量蛋白質上面，而我們目前選定之蛋白質為牛血清蛋白(bovine serum albumin；BSA)。於製備出「藥物-蛋白質生物共軛物」後，以小鼠腹腔注射免疫的方式，才可能會誘導免疫反應。本研究採用6~8週齡balb/cj小鼠來生產單株抗體。方式為取50μg 生物共軛物加入0.5ml PBS溶液與0.5ml弗氏佐劑混合均勻，除了第一次免疫使用弗氏完全佐劑，其餘皆使用弗氏不完全佐劑乳化抗原進行免疫。分別在第一次免疫前與第四次免疫後十天採血，並利用間接型ELISA檢測免疫小鼠血清中相對應的抗體情形。於第四次免疫三週後進行最後加強注射0.5ml不含佐劑的抗原，並在第五天後取免疫小鼠脾細胞以及小鼠骨髓癌細胞(NS-1)進行細胞融合，融合當天為Day0 ( D(0) )。其後十天進行HAT的細胞篩選，只有融合成功的細胞株才會存活下來，並分別於D10、D20取上層培養液進行間接型ELISA檢測細胞分泌抗體的情況。結果：(一)化學合成生物共軛物：在利用ESI-Q-TOF MS分析蛋白質上FM2的鍵結數目，顯示有0.9-7個FM2鍵結 (二)ELISA效價分析：血清效價於第四次免疫後呈現增加的情形；在細胞融合效價方面亦呈現不錯的情形。結論：未來將繼續單株抗體生產工作的完成，並期能進一步應用於毒品濫用檢測工具開發上。
Relation:	第五屆海峽化學、生物及材料研討會，起迄日：2008/07/21-2008/07/22，地點：嘉南藥理科技大學
Appears in Collections:	[Dept. of Cosmetic Science and institute of cosmetic science] Proceedings [Dept. of Biotechnology (including master's program)] Proceedings [Pharmacy and Science] The 5rh Conference of Channel-bridge Chemistry, Biology and materal Science

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