具標靶功能聚胺基奈米矽微粒與聚胺基甲酸酯共聚物之基因載體合成及轉染效率研究

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標題:	具標靶功能聚胺基奈米矽微粒與聚胺基甲酸酯共聚物之基因載體合成及轉染效率研究
作者:	蕭翔友鍾仁宏蔡百豐蕭明達
貢獻者:	嘉南藥理大學生物科技系嘉南藥理大學職業安全衛生系
關鍵字:	陽離子型高分子奈米矽製備聚胺基甲酸酯基因載體
日期:	2015-05-05
上傳時間:	2018-03-27 10:41:43 (UTC+8)
摘要:	基因治療的成功必須仰賴一個優秀的輸送系統，而一個良好的基因載體則必須要有幾個重要的條件。本研究擬利用有機合成方式製備陽離子基因載體( cationic gene carrier )來攜帶siRNA ( Small interfering RNA or silencing RNA ) 的DNA 模板進入癌細胞進行表現，並在載體上加上葉酸( Folic acid ) ，使合成出來的材料具備癌細胞標靶功能，在材料合成部分主要分為六個步驟。第一個步驟是將Glycidyl methacrylate 與1,4-Diaminobutane 進行反應合成出產物EOD ；第二個步驟則是將EOD 與3-Amino-1-propanol 進行聚合反應，產生產物PEOH；第三步驟則是將產物PEOH 與Ethyl isocyanatoacetate 以重量比1:1 的比例進行合成，形成產物PEU；第四步驟則是將具有癌細胞標靶效果的葉酸分子接到PEU 的側鏈NH 基上；第五步驟則是要先製備聚胺基奈米矽微粒，再以奈米矽微粒上所帶之NH 基攻擊PEU 側鏈上未與葉酸結合的酯鍵，將矽微粒接到PEU 上，使我們的產物側鏈官能基帶有許多帶正電的奈米矽微粒；最後步驟則是將所合成出來的產物與所欲搭載之基因體以正負電相吸的方式進行複合，在進行最後一個步驟前，會將所合成出來的材料利用MTT assay 的方法進行細胞毒性測試，以及測試葉酸在我們藥物載體上對於癌細胞的標靶效果。如果細胞毒性低於一般化療藥物以及其他藥物載體；對於癌細胞亦具有良好的標靶效果，我們將再進行材料酸鹼緩衝效果的測試，了解其穩定結構所需要的最適合pH 範圍，再利用綠螢光蛋白基因的表現量來了解材料所搭載基因體的轉染效果。另外也會利用膠體電泳(Gel electrophoresis)來了解一單位之材料所能攜帶的最大基因體量，以及利用北方墨點法來檢測我們送進癌細胞的基因體是否成功轉錄出si RNA 。
關聯:	2015 第九屆嘉南藥理大學藥理學院師生研究成果發表會，起迄日：2015/05/05-2015/05/08，地點：嘉南藥理大學國際會議中心一樓
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