Production and Purification of Polyclonal Antibodies against Methamphetamine

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標題:	Production and Purification of Polyclonal Antibodies against Methamphetamine
作者:	陳美吟(Mei-Yin Chen) 楊朝成(Chau-Chen Yang) 張竣凱(Jiunn-Kac Chang) 周淑芬(Shu-Fen Chou)
貢獻者:	嘉南藥理科技大學生物科技系嘉南藥理科技大學化妝品科技研究所
日期:	2008-07
上傳時間:	2017-12-04 15:58:46 (UTC+8)
摘要:	背景與目的:甲基安非他命 (methamphetamine ; METH) 為作用在中樞神經系統的一種精神興奮劑，也是在台灣常見的濫用藥物之一，並列為二級管制藥品管理。目前 METH 被限制用於治療嗜睡、注意力不集中以及肥胖等疾病，但因為 METH 具有促使體重減低、振奮精神、合成容易、產生欣快感以及成癮性等作用，導致濫用藥物的情形日趨嚴重。本研究為生產抗 METH 之多株抗體，未來可應用於免疫試片系統之開發。由於小分子 METH (約149.233 g/mol) 不易在小鼠體內引起免疫反應，故本研究挑選牛血清蛋白(bovine serum albumin ; BSA) 以及絲膠蛋白 (sericin)，分別與METH合成生物共軛物，藉由大分子蛋白誘導小鼠體內產生METH 之抗體。方法:本研究利用化學合成方式，將 METH與 BSA和 sericin合成生物共軛物，並藉由 SDS-PAGE與 ESI-Q-TOF MS 檢測探討生物共軛物合成之最佳條件。分別將兩種生物共軛物以腹腔免疫注射方式免疫 Balb/c 小鼠，每隔十天免疫一次。程序為取 80μg生物共軛物加入0.5 mL PBS 溶液和0.5 mL弗氏完全佐劑混合均勻，除第一次免疫使用弗氏完全佐劑，其餘皆使用弗氏不完全佐劑乳化抗原進行免疫。分別在第一次免疫前與第四次免疫後七天採血，並應用間接型 ELISA方法檢測兩種生物共軛物對小鼠之免疫效果。獲得高度免疫之小鼠，於十天後，注射0.5 mL Pristane 和 106 個 NS-1骨髓癌細胞。觀察小鼠腹部增大情形，並在未造成小鼠活動困難前，收集小鼠腹水。最後以 HitrapTM rProtein A Fast Flow 親和性管柱進行腹水抗體之純化。結果 : (一) 化學合成生物共軛物 : 以之前實驗探討最佳條件之化學合成方式鍵結 METH 與蛋白質，在利用 ESI-Q-TOF MS 分析蛋白質上 METH 鍵結數目，由數據中顯示，一分子 BSA鍵結約 4-18 個 METH，而一分子 sericin 鍵結約 21 個METH。(二) SDS-PAGE : 利用此方法比對 BSA 與 sericin 再透過化學合成方式後能保留其分子量。 (三)小鼠免疫 : 透過間接型 ELISA 的方法顯示出，四次免疫後 BSA-METH 與 sericin-METH 皆能在小鼠體內產生免疫反應。結論 :已成功利用化學方式合成出 BSA-METH與sericin-METH之生物共軛物，兩種生物共軛物並能在小鼠體內發生免疫反應，尤其是利用BSA-METH當免疫原其效果較好，並成功純化出抗METH之多株抗體，未來將應用於免疫層析試片系統之開發。
關聯:	第五屆海峽化學、生物及材料研討會，起迄日：2008/07/21-2008/07/22，地點：嘉南藥理科技大學
顯示於類別:	[化妝品應用與管理系(所)] 會議論文 [生物科技系(所)] 會議論文 [藥理學院] 2008第五屆海峽化學、生物及材料研討會

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