老鼠Lrwd1基因在造精過程的表現與位置之研究

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標題:	老鼠Lrwd1基因在造精過程的表現與位置之研究 The expression and localization study of Lrwd1 during mouse spermatogenesis
作者:	廖明慧
貢獻者:	嘉南藥理科技大學：生物科技系暨研究所鄧燕妮
關鍵字:	LRWD1 中心體中心體蛋白 γ-tubulin 造精過程 middlepiece LRWD1 Centrosome γ-tubulin spermatogenesis
日期:	2009
上傳時間:	2011-10-27 14:43:12 (UTC+8)
摘要:	Leucine-Rich repeats and WD repeat domain containing 1 (LRWD1)為一種在睪丸組織裡大量表現的基因。老鼠的lrwd1基因位於染色體5qG2，整個基因體大小為13003bp，並含有15個外子 (exons)。利用SMART網站 (http://smart.embl - heidelberg.de/)預測老鼠LRWD1蛋白的重要domains，發現LRWD1蛋白有一個白胺酸多重複序列 (Leucine-Rich repeats, LRR) 與四個色胺酸-天門冬胺酸 (trypotophan-aspartic acid, WD40)的motifs。而在親緣性序列分析 (phylogenetic relation analysis)則發現LRWD1在靈長類動物是有相當高的保守性序列，並且老鼠與人類LRWD1的保守性序列高達70%，本研究主要探討老鼠LRWD1在生殖細胞的表現及弁鄖丹漶C在北方墨點法分析中，老鼠 Lrwd1 mRNA大小約為3.0 kb，為單一轉錄基因且專一性表現於睪丸組織，在西方墨點法分析，老鼠 Lrwd1蛋白大小為71 kDa，並且專一的表現於睪丸組織中，在免疫組織化學染色法的研究分析中，發現LRWD1蛋白表現在老鼠造精過程的細胞，尤其靠近內腔的位置有大量的表現。綜合以上實驗結果老鼠LRWD1為專一且大量的表現於睪丸組織中。以分離不同時期的老鼠精細胞LRWD1之表現的實驗中，發現LRWD1蛋白在老鼠從早期精細胞的細胞質持續到造精過程的後期。以免疫螢光染色分析GC-2細胞分裂時期不同時期centrosome位置，確定LRWD1確實表現在細胞centrosome位置。在老鼠精細胞中發現LRWD1表現於中段 (middle piece)的頸部 (neck)與頭部 (head)上，與位置中心體蛋白γ-tubulin位置相同，所以LRWD1蛋白為中心體蛋白 (centrosomal protein)後選基因。我們以老鼠睪丸組織切片來看LRWD1的表現，發現從造精過程的初期在細胞質就開始有微量的表現，一直持續到造精過程的後期為大量表現靠近內腔的位置。之後在共同免疫沉澱法實驗中，發現以LRWD1抗體或γ-tubulin抗體與lrwd1蛋白或γ-tubulin蛋白經由共同免疫沉澱的方式，皆可形成蛋白結構上的複合物，證實LRWD1蛋白為中心體的組成蛋白 (centrosomal protein)，且與γ-tubulin有直接的作用。綜合以上研究成果證實LRWD1蛋白為大量且專一性表現於睪丸組織中，LRWD1是中心體的組成蛋白 (centrosomal protein)，而LRWD1在精蟲發育的角色與功能，則有待進一步深入研究。 The mouse Lrwd1, a novel testis gene, is localized to chromosome 5qG2. Mouse Lrwd1 genome contains 13007 base pairs (bp) and 1944-bp open reading frame encoding a 648-amino acid protein (size approximately 71 kDa) with 78.3% amino acid sequence identity with the human LRWD1 testis homologous protein. The specific polyclonal antibodies of mouse LRWD1 are prepared by using specific peptide (peptide sequence) immunized in rabbits. The Lrwd1 is highly expressed in mouse testis at RNA and protein levels by Northern blot, and Western blot analyses. Mouse LRWD1 protein is expressed in the cytoplasm of primary spermatocytes to mature spermatozoa and weakly in spermatogonia during spermatogenesis. Mouse LRWD1 is found mainly in the connection region between head and neck, and less in the head and tail of mouse spermatozoas. Mouse LRWD1 is a centrosomal protein of spermatozoa by colocalization and coimmunoprecipication with γ-tubulin. These results suggest that the putative LRWD1 protein may play an important role in testicular development/ spermatogenesis.
關聯:	校內一年後公開，校外永不公開，學年度：97，99 頁
顯示於類別:	[生物科技系(所)] 博碩士論文

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