斑馬魚金屬應答轉錄因子Mtf-1與粒線體的NADH去氫酶第一次單元之蛋白質關聯性研究

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Title:	斑馬魚金屬應答轉錄因子Mtf-1與粒線體的NADH去氫酶第一次單元之蛋白質關聯性研究
Authors:	陳玟雅
Contributors:	生物科技系
Keywords:	斑馬魚第一型金屬應答轉錄因子金屬應答元件粒線體酵母菌雙雜交系統 β-半乳醣苷酶分析共免疫沉澱法整體原位雜合法
Date:	2010
Issue Date:	2011-02-22 15:39:44 (UTC+8)
Abstract:	細胞中的第一型金屬應答轉錄因子(以下簡稱Mtf-1)受到金屬刺激而活化，尤其對細胞內游離態鋅具有感應性，當重金屬鋅或鎘離子出現，Mtf-1調控位於基因上游啟動子的金屬應答元件(MRE)，促進保護性分子的基因轉錄作用。我們探索Mtf-1 如何參與維持生物體內部金屬恆定及其對於生命形成的胚胎發育時期的重要性等問題，因此探尋Mtf-1可能與哪些蛋白質結合及其相互作用的機制與意義。目前我們已利用酵母菌雙雜交法搜尋與Mtf-1發生交互作用的相關蛋白質，其中包括粒線體呼吸鏈作用的重要蛋白質。至今尚無相關報告提到Mtf-1與粒線體呼吸鏈相關酵素的功能有關，因此須要實驗設計來釐清與證實。目前已完成的相關工作如下，將斑馬魚粒線體的NADH-1基因進行選殖，設計不同蛋白質區段進行基因重組，將NADH-1與Mtf-1再度利用酵母菌雙雜交系統的β-半乳醣苷酶分析法驗證與Mtf-1作用的關係，藉以比較不同胺基酸片段長度的蛋白質是否造成蛋白質之間交互作用的差異性影響。同時利用in vivo 免疫共沉澱分析法(Co-IP)等，進一步確認粒線體呼吸鏈相關酵素NADH-1與Mtf-1 結合及其之間的依存關係。最後，對於Mtf-1 出現在細胞質的粒線體中之現象提出二種可能性的推論：其一，是Mtf1 扮演轉錄因子角色調控粒線體內相關基因的轉錄表現；其二，是Mtf1 協助粒線體內部的某些蛋白質進行相關作用。最後，本研究利用酵母菌雙雜合系統及免疫共沉澱法分析法證實Mtf1 與ND1蛋白質有關連性。
Relation:	計畫編號：CN9942；計畫年度：99
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