丁香醇和異丁香醇衍生物之體外細胞模式及體內內毒素模式之抗發炎活性評估與訊息傳遞路徑之探討

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標題:	丁香醇和異丁香醇衍生物之體外細胞模式及體內內毒素模式之抗發炎活性評估與訊息傳遞路徑之探討 Anti-Inflammatory Activity and Signal Transduction Pathways of Eugenol and Isoeugenol Derivatives in Lipopolysaccharide-Stimulated Raw 264.7 Macrophages and in vivo Endotoxemic Model
作者:	劉淑芬葉竹來
貢獻者:	藥學系
日期:	2009
出版者:	台南縣：嘉南藥理科技大學藥學系
摘要:	目前用於治療發炎疾病的藥物選擇通常是需長期使用且帶有嚴重副作用，因此找尋有效但較無副作用的藥物便成為熱門的研究方向。丁香醇與異丁香醇是丁香油中的有效成分，通常被當成香料使用。除此之外，這些成分也被用在化妝品、牙醫及傳統醫藥中。雖然這些成分被認為具有抗氧化及抗發炎作用，但在高濃度時卻變成氧化劑及強過敏原。由於丁香醇及異丁香醇具有多種生物用途，於是本實驗室合成了一系列丁香醇及異丁香醇衍生物eugenolol、isoeugenolol、isoeugenodilol 和glyceryl-isoeugenol。我們已經發表這些衍生物具有血管擴張、抗氧化、氣管擴張乙型腎上腺素受體阻斷功能或甲型腎上腺素受體阻斷，但其抗發炎功能尚未被確定。在此研究計畫中，我們將會探討這些衍生物在體外及體內的抗發炎作用及機轉。在第一年的研究中，主要針對衍生物對RAW 264.7巨噬細胞在脂多醣體誘發下的 iNOS、TNF-與COX-2 基因表現及NF-B、C/EBP、AP-1 和CREB等轉錄因子的活化進行研究。以逆轉錄-聚合酵素連鎖反應和西方墨點法分析iNOS、TNF-和COX-2 基因表現，另用Griess reagent 分析一氧化氮的生成量。根據預試驗結果顯示，其中的兩個衍生物eugenolol 和glyceryl-isoeugenol較原料藥對脂多醣體所誘發的COX-2、 iNOS 及NO 生成量有明顯的抑制作用。為了進一步瞭解衍生物對轉錄因子活化的影響，用電泳移動偏移分析法分析NF-B、C/EBP、AP-1 和CREB 等轉錄因子與DNA 結合的能力，而p65 和IB於核質的分布則用西方墨點法分析。另外，文獻指出以脂多醣體刺激RAW 264.7巨噬細胞會活化MAPKs (p38, ERK1/2, and JNK1/2) 和Akt 等路徑以及造成IB 蛋白分解及接下來的NFB p65 的核轉移與AP-1, NF-B 與 CREB 等轉錄因子的活化。為了探討衍生物對脂多醣體所誘發的iNOS 與COX-2 蛋白質表現抑制作用的訊息傳遞路徑，我們將會以西方墨點法分析MAPKs 及Akt 等相關路徑的作用。此外，脂多醣體也會經由活化膜上的NADPH oxidase 產生活性氧屬，而活性氧屬在活化NF-B 和MAPKs 上也扮演重要角色，而細胞內活性氧屬的生成將以 DCFH2-DA 試劑來分析。經由第一年的研究可得知哪些活性衍生物可有效抑制PGE2 及NO產生、抑制 COX-2 及iNOS 蛋白表現、及抑制哪個轉錄因子的活化作用，進而抑制發炎反應，但是對於衍生物是否在動物體內對iNOS 與COX-2 的表現及NO生成量的抑制效果仍未確認。因此第二年的研究擬利用動物模式探討衍生物對脂多醣體所誘發小鼠內毒素血症 (endotoxemic model) 的影響，探討與細胞模式結果之一致性。小鼠在腹腔注射給予脂多醣體之前先投予活性衍生物或之後再給衍生物來觀察活性衍生物對小鼠內毒素血症之預防與治療作用。我們將監測小鼠存活率、血中NO 與PGE2 的含量以及分析肝、肺等組織病理學變化，為了進一步探討其機轉，我們將測量血中各種細胞激素量的變化。此外，以西方墨點法分析肝、肺組織內轉錄因子的核轉位現象與iNOS、COX-2 蛋白表現量。我們也將探討活性衍生物是否可藉由清除自由基的保護機制來減少多醣體對組織所造成的損傷。由以上結果或許可得知活性衍生物是否比原料藥具有更強的抗發炎活性。總結來說，我們將首次發表丁香醇和異丁香醇衍生物對巨噬細胞以脂多醣體誘發 iNOS 與COX-2 表現的抑制作用與結構的關係，我們的研究也將提供丁香醇及異丁香醇衍生物之抗發炎效果的分子研究基礎。我們期望這些研究成果將可提供一個正向的藥理學基礎，而推論這些衍生物可能提供許多在預防與治療發炎相關性疾病的優點。
關聯:	計畫編號：NSC98-2320-B041-001
顯示於類別:	[藥學系(所)] 科技部計畫

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