DSpace community: 新藥創建研究中心
https://ir.cnu.edu.tw/handle/310902800/32031
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費氏麴菌二次代謝物純化及生物活性分析
https://ir.cnu.edu.tw/handle/310902800/31435
title: 費氏麴菌二次代謝物純化及生物活性分析 abstract: 真菌產生的二次代謝物對於人類有許多貢獻,例如青黴菌產生的盤尼西林(penicillin)具有殺菌功效、土麴菌產生的洛伐他汀(lovastatin) 具有降低血膽固醇之作用,即使已有許多真菌二次代謝物的作用已被揭露,但應仍有許多未知的真菌二次代謝物具有很大的應用潛力。本研究探討費氏麴菌(Neosartorya fischeri) 產生主要二次代謝物acetylaszonalenin 之生產優化條件及其生物活性。
使用高效能液相層析儀分析顯示滯留時間22.5 分鐘時偵測到acetylaszonalenin 波峰,並以LC-ESI/MS 進一步確認acetylaszonalenin 無誤。同時發現當液態培養溫度上升,費氏麴菌能夠產生更多的acetylaszonalenin,此條件有利於提高此化合物的產量。生物活性之分析分為兩部份,分別為自由基清除率與細胞存活測試進行之。結果顯示粗萃物具有毒殺人類大腸直腸癌細胞(SW620) 但無法清除自由基。
本研究成功藉由改善培養條件增加acetylaszonalenin 之產量, 且發現以acetylaszonalenin 為主的N. fisheri 粗萃物具有新藥開發的可能。
<br>費氏麴菌發酵物之分離及抑制大腸直腸癌細胞之研究
https://ir.cnu.edu.tw/handle/310902800/31434
title: 費氏麴菌發酵物之分離及抑制大腸直腸癌細胞之研究 abstract: 費氏麴菌(Neosartorya fischeri)於分類學屬於真菌界(Fungi)、子囊菌門(Ascomycota)、散囊菌綱(Eurotiomycetes)、散囊菌目(Eurotiales)、髮菌科(Trichocomaceae)、新薩托菌屬(Neosartorya),喜好潮濕環境,適合生長的溫度在10oC~52oC,最佳生長溫度為26oC~45oC。近年發現麴菌屬可產生主結構為diketopiperazine 二次代謝物,具有抗腫瘤、抗病毒與抗真菌等生物活性,而自費氏麴菌中所含有大量的acetylazonalenin,屬於diketopiperazine 衍生物,但至今尚無生物活性的報導。由於國人十大死因統計數據排行首位的惡性腫瘤中,大腸直腸癌在全惡性腫瘤中排行第三,嚴重可致死。在許多的抗癌方法中,目前最受重視的方法之一是天然物的抗癌活性,因此為了得知acetylazonalenin 是否具有抑制大腸直腸癌潛力,因而進行此項研究。
我們尋找到費氏麴菌產生更大量acetylazonalenin 的培養條件並萃取二次代謝物,進行DPPH 自由基清除試驗與細胞存活率測試,以了解富含acetylazonalenin 的粗萃物可能具有的生物活性。細胞存活率測試結果得知,費氏麴菌二次代謝物處理人類大腸直腸癌細胞後,產生細胞毒殺效果;DPPH 自由基清除試驗則發現此粗萃物似乎並無明顯之自由基清除效果。目前由此兩項實驗結果,我們推測acetylazonalenin 應具有開發為抗癌藥物的應用價值,至於其毒殺癌細胞的機轉為何,則需進一步研究。
<br>合併使用上皮生長因子受體抑制劑 Gefitinib 與肝細胞生長因子受體抑制劑SU11274 可達較佳的乳癌抑制效果
https://ir.cnu.edu.tw/handle/310902800/31432
title: 合併使用上皮生長因子受體抑制劑 Gefitinib 與肝細胞生長因子受體抑制劑SU11274 可達較佳的乳癌抑制效果 abstract: 目前的研究顯示許多抗癌藥物,例如上皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)的抑制劑,在臨床上的效果不如預期。近年來的研究發現許多癌症病人腫瘤周圍的纖維母細胞會提供肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF),協助癌細胞的生長,使EGFR抑制劑無法達到預期的效果。癌細胞本身並不會製造HGF,因此單以癌細胞的培養來測試抗癌藥物,實際上無法模擬癌細胞於體內生長的環境狀況。此外,三陰性乳癌(triple negative breast cancer,TNBC),意指雌激素受體(estrogen receptor,ER)、黃體素受體(progesterone receptor,PR)、第二型人類上皮細胞生長因子受體(human epidermal growth factor receptor 2,HER 2)三者皆為陰性的乳癌,缺乏有效的標靶藥物,在治療上較為棘手。為了解決這些問題,我們以三陰性乳癌細胞MDA-MB-468 與乳癌纖維母細胞共同培養,來測試藥物對乳癌細胞形成細胞群落的抑制能力。我們測試以EGFR抑制劑-Gefitinib 與HGF 受體(c-Met)抑制劑- SU11274 合併使用來達到有效抑制腫瘤生長的可能性,結果顯示將此兩種抑制劑合併使用確實有加乘的抑制腫瘤形成的效果。進一步的研究發現,此兩種藥物皆無法有效地降低乳癌細胞與乳癌纖維母細胞的存活率,顯示其可能藉由別種機制來抑制腫瘤的生成。我們的實驗結果顯示結合EGFR 抑制劑與HGF受體抑制劑來抑制腫瘤的生長,為具有潛力的乳癌治療策略,值得進一步運用於臨床治療上。
<br>以半生物合成生產之Aspergillus terreus 二次代謝物活性分析
https://ir.cnu.edu.tw/handle/310902800/31388
title: 以半生物合成生產之Aspergillus terreus 二次代謝物活性分析 abstract: In recent years, secondary metabolites produced by biosynthetic engineering are found to be greater potential and can replace synthetic chemicals. Filamentous fungi produce secondary metabolites with distinct structures and various biological activities for a wide range in biotechnology, food, and medical fields. A putative acetylaszonlenin-biosynthetic gene cluster was identified in the genome sequence of Aspergillus terreus. This cluster consists of three genes, anaPS, anaPT, and anaAT. We studied the semi-biosynthesis of acetylaszonalenin in anaPS deletion mutant in order to identify and/or produce more bioactive natural compounds from A. terreus. The precursor of acetylaszonalenin, benzodiazepinedione, catalyzed by anaPS in the biosynthetic pathway of acetylaszonalenin was chemically synthesized. A. terreus anaPS deletion strain was cultured with benzodiazepinedione. The semi-biosynthesis of acetylaszonalenin was studied in the feeding of precursor, benzodiazepinedione, and adaption of environmental factors such pH value, temperature, speed, etc. The results indicated that acetylazonalenin was successfully obtained in A. terreus anaPS deletion strain after benzodiazepinedione-feeding. The dominant peak of interest, acetylaszonalenin, appeared in HPLC chromatogram at Tr 22.5 min. The increase of temperature could raise the yield of acetylaszonalenin. MTT assay was performed in various concentrations of crude extracts of benzodiazepinedione-treated anaPS-deletion A. terreus ferment. The results shown that there is around 60% cell viability after 24-hour treatment when colon cancer cells were tested with these crude extracts of mycelial liquid culture, but there is no cytotoxicity in HaCaT cells. In addition, crude extracts of A. terreus wild type, anaPS deletion strain, and benzodiazepinedione-feeding strain were shown the antioxidant capacity. The semi-biosynthetic system we successfully established should be useful for the application of elucidating the functions and the production of fungal secondary metabolites.
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