構築篩選分別含有蝦白點病毒 wssv071  與 wssv524  基因之重組

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標題:	構築篩選分別含有蝦白點病毒 wssv071 與 wssv524 基因之重組
作者:	林耕民陳昱瑋田乃月
貢獻者:	生物科技系
關鍵字:	白點症病毒 wssv071 wssv524 構築篩選
日期:	2017
上傳時間:	2022-01-25 15:10:04 (UTC+8)
摘要:	白點症病毒（White spot syndrome virus, WSSV）為一種新興大型雙股DNA 病毒，病毒顆粒具有套膜呈長桿狀，一端具有尾狀突起，但其基因體與蛋白體的研究資料大異於現今已知的雙股DNA 病毒，因此國際病毒分類委員會將之新分類至Nimaviridae 病毒科，Whispovirus 病毒屬。WSSV 自1992 年起造成全球蝦養殖業的重大損失，故迫切需要建立有效的治療防疫策略，但首先必須先對WSSV 與寄主蝦體的感染互動作用機制有所了解，因此本研究擬就WSSV 病毒顆粒中的兩種可能表現的基因片段（wssv071 與wssv524），探討其所表現的蛋白質是否有存在交互作用關係，及其對感染寄主所可能產生之作用機制。目前由WSSV 的基因體序列分析資料中，已知 wssv071 基因與wssv524 基因的開放譯讀區全長分別為393 和3732 bp，預估可轉譯出的胜?鏈長度分別為130 和1243 個胺基酸，再推測蛋白質分子量各約為14.45 及136.73 kDa。為了能夠以酵母菌雙雜交技術分析兩種蛋白質間交互作用關係，故選擇能在酵母菌體內表現蛋白質的載體pGADT7與pGBKT7 進行WSSV 兩基因之構築；另採用大腸桿菌篩選系統進行快速構築篩選，已獲得正確重組質體並能大量擴增。在構築過程中以PCR 先各合成出wssv071 與wssv524 基因片段，再搭配限制?剪切、黏合至質體（pGADT7 與pGBKT7）及轉形作用送入大腸桿菌DH5α；隨後以colony PCR、質體DNA 剪切電泳分析及基因定序等方法，篩選出含有正確之pGADT7-WSSV071 與pGBKT7-WSSV524 重組質體的大腸桿菌株。目前本研究含pGADT7-WSSV071 重組質體的大腸桿菌株已篩選出，且確認其中wssv071 核?酸序列相同於NCBI 資料庫所公布序列；但因wssv524 核?酸序列較長，構築篩選難度較高，所以目前仍在進行中。另本研究以PCR 合成之wssv524 核?酸序列經二次定序後，發現有部分核?酸序列不同於NCBI 資料庫所登載之序列，其差異原因尚待分析探討中。後續實驗期望完成含pGBKT7-WSSV524 重組質體之大腸桿菌株的建立，以便能大量擴增兩重組質體DNA，並成功轉形入酵母菌（AH109 與Y187），得以進行酵母菌雙雜交試驗，探討wssv071 和wssv524 兩蛋白質的交互作用關係，以有助於未來研究探討WSSV 的感染繁殖與致病機轉。
關聯:	2017 第十一屆嘉南藥理大學藥理學院師生研究成果發表會，起迄日：2017/05/02-2017/05/04
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