基因重組酵母菌轉化 Daidzein 與Genistein 之研究

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標題:	基因重組酵母菌轉化 Daidzein 與Genistein 之研究
作者:	賴心盈馮于珊曾映云
貢獻者:	嘉南藥理大學生物科技系江建民
關鍵字:	異黃酮細胞色素P450 生物轉化
日期:	2016-05-10
上傳時間:	2018-05-21 10:36:35 (UTC+8)
摘要:	本研究利用基因重組技術構築了一個CYP450 的系統，將鏈黴菌(Streptomyces avermitilis) MA4680 的細胞色素P450(cytochrome P450 monooxygenase, P450) 基因CYP105D7 與來自麵包酵母(Saccharomyces cerevisiae) 細胞色素P450 還原酶(reductase partner)，再加上米麴菌(Aspergillus oryzae) CYP57B3 N 端一段疏水性穿膜區塊(transmembrane domain , TMD)進行穿膜融合蛋白質基因表現，並選殖進入Pichia pastoris中。其中鏈黴菌MA4680 CYP105D7 的細胞色素P450 具有轉換異黃酮並產出具氫氧化異黃酮衍生物的功能。本研究測試這樣的組合是否可以成為Self-sufficient 生物轉化系統。本研究中測試此系統的轉化 Daidzein 與Genistein 情形，以及菌數多寡對產物生成的影響。利用高效液相層析法及比對標準品分析結果顯示；轉化Daidzein 主要有兩個產物，分別出現在約12 分(6-OHDE)與23 分(未知)；而轉化Genistein 有兩個產物，分別出現在15.4 分(3’-OHGE)及約27 分(未知)， Genistein 可轉換出3’-OHGE 是前所未有的。針對Daidzein 不管接種菌量的多寡，其產物6-OHDE 於72 小時達到產量的高峰，而另外一個未知產物於24 小時達到產量的高峰，隨著時間，產物漸漸下降；針對Genistein不管接種菌量的多寡，其產物3’-OHGE 在48 小時達到產量的高峰，隨著時間產物消失，當以4%菌量接種時， Genistein 的未知產物於48 小時達到高峰，隨著時間下降，而以10%菌量接種時，其產物最高峰出現在96 小時。相較其產物積分面積圖，Daidzein的產物優於Genistein 的產物。因此利用重組P. pastoris 轉化Daidzein 產生異黃酮多酚衍生物之效率優於轉化Genistein。
關聯:	2016 第十屆嘉南藥理大學藥理學院師生研究成果發表會，起迄日：2016/05/10-2016/05/13，地點：嘉南藥理大學國際會議中心一樓專題實作
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