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    標題: Fluntirazepam(FM2) 單株抗體生產之研究
    Studies on the Development of Production of Monoclonal Antibodies against Flunitrazepam (FM2)
    作者: 周淑芬(Shu-Fen Chou)
    黃國旭(Guo-Xu Huang)
    張竣凱(Jiunn-Kae Chang)
    楊朝成(Chau-Chen Yang)
    貢獻者: 嘉南藥理科技大學生物科技系
    嘉南藥理科技大學化粧品科技研究所
    日期: 2008-07
    上傳時間: 2017-12-04 15:57:44 (UTC+8)
    摘要: 背景與目的:FM2學名Flunitrazepam,商品名為Rohypnol,FM為學名前後英文字母的縮寫;其商業製劑每顆通常為2毫克,因此得名為FM2。屬於Benzodiazepine類的鎮靜劑,在世界各國幾乎都使用此藥作為中長效性安眠藥,而因為其無色無味有很好的水溶性,溶解後不易被察覺,常將其滲入飲料迷昏女性,再加以強暴,故有「約會強暴丸」之稱。分子式為C16H12FN3O3,分子量為313.3 Dalton。口服後可被人體完全吸收,其藥理機轉為先活化GABA(γ-Aminobutyric acid;γ-胺基丁酸),使其作用於GABA receptor上,進而活化副交感神經使人達到放鬆目的;因為GABA是抑制性的神經傳導物質,除了鎮靜效果,還具有安神、肌肉鬆弛、抗癲的療效。本篇研究目的為生產製備具有辨識FM2分子能力的單株抗體。方法:首先,由於FM2分子量太小,在生產抗體的過程上會遇到無法發生體液性免疫的反應,因此要先把FM2運用bioconjugate的方式接在其他大分子量蛋白質上面,而我們目前選定之蛋白質為牛血清蛋白(bovine serum albumin;BSA)。於製備出「藥物-蛋白質生物共軛物」後,以小鼠腹腔注射免疫的方式,才可能會誘導免疫反應。本研究採用6~8週齡balb/cj小鼠來生產單株抗體。方式為取50μg 生物共軛物加入0.5ml PBS溶液與0.5ml弗氏佐劑混合均勻,除了第一次免疫使用弗氏完全佐劑,其餘皆使用弗氏不完全佐劑乳化抗原進行免疫。分別在第一次免疫前與第四次免疫後十天採血,並利用間接型ELISA檢測免疫小鼠血清中相對應的抗體情形。於第四次免疫三週後進行最後加強注射0.5ml不含佐劑的抗原,並在第五天後取免疫小鼠脾細胞以及小鼠骨髓癌細胞(NS-1)進行細胞融合,融合當天為Day0 ( D(0) )。其後十天進行HAT的細胞篩選,只有融合成功的細胞株才會存活下來,並分別於D10、D20取上層培養液進行間接型ELISA檢測細胞分泌抗體的情況。結果:(一)化學合成生物共軛物:在利用ESI-Q-TOF MS分析蛋白質上FM2的鍵結數目,顯示有0.9-7個FM2鍵結 (二)ELISA效價分析:血清效價於第四次免疫後呈現增加的情形;在細胞融合效價方面亦呈現不錯的情形。結論:未來將繼續單株抗體生產工作的完成,並期能進一步應用於毒品濫用檢測工具開發上。
    關聯: 第五屆海峽化學、生物及材料研討會,起迄日:2008/07/21-2008/07/22,地點:嘉南藥理科技大學
    Appears in Collections:[化妝品應用與管理系(所)] 會議論文
    [生物科技系(所)] 會議論文
    [藥理學院] 2008第五屆海峽化學、生物及材料研討會

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